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<title>Pulldown-Assay</title>

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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading"><span class="mw-page-title-main">Pulldown-Assay</span></h1>

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</div>

<div id="mw-content-text" class="mw-body-content mw-content-ltr" lang="de" dir="ltr"><div class="mw-content-ltr mw-parser-output" lang="de" dir="ltr"><p>Ein <b>Pulldown-Assay</b> ist eine Methode, die in der <a href="Biochemie" title="Biochemie">Biochemie</a> verwendet wird, um <i><a href="In_vitro" title="In vitro">in vitro</a></i> Bindungen zwischen <a href="Makromolek%C3%BCl" title="Makromolekül">Makromolekülen</a>, meist <a href="Protein-Protein-Interaktion" title="Protein-Protein-Interaktion">Protein-Protein-Interaktionen</a>, nachzuweisen. Die Methode kann verwendet werden, um für ein vorhandenes Zielmolekül (engl. <i>bait</i> ‚Köder‘) einen oder mehrere Interaktionspartner (engl. <i>prey</i> ‚Beute‘) zu identifizieren, oder um mit <a href="Proteomik" title="Proteomik">anderen Methoden</a>, wie z. B. dem <a href="Yeast_Two-Hybrid_System" class="mw-redirect" title="Yeast Two-Hybrid System">Yeast Two-Hybrid-System</a>, nachgewiesene Interaktionen zu bestätigen.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Prinzip">Prinzip</h2></div>

<p>Pulldown-Assays basieren dabei auf der <a href="Affinit%C3%A4t_(Biochemie)" title="Affinität (Biochemie)">Affinität</a> des <i>bait</i>-Moleküls zu seinem <i>prey</i>-Molekül, welches an einer Matrix gebunden ist. Hierzu wird das <i>bait</i>-Molekül meist mittels der Generierung eines <a href="Fusionsprotein" title="Fusionsprotein">Fusionsproteins</a> mit einem <a href="Protein-Tag" title="Protein-Tag">Protein-Tag</a> (engl. Etikett) versehen und über diesen an eine geeignete <a href="Chromatographie#Stationäre_Phase" title="Chromatographie">Matrix</a> gebunden. Die Matrix besteht meist aus <a href="Vernetzung_(Chemie)" title="Vernetzung (Chemie)">quervernetztem</a> <a href="Dextran" class="mw-redirect" title="Dextran">Dextran</a> oder <a href="Agarose" title="Agarose">Agarose</a>. Nach der Zugabe möglicher Interaktionspartner, z. B. in Form eines <a href="Lyse_(Biologie)" title="Lyse (Biologie)">Zelllysats</a> und geeigneten Waschschritten verbleiben die Interaktionspartner an das <i>bait</i>-Molekül und damit an die Matrix gebunden und können anschließend <a href="Elution" title="Elution">eluiert</a> und analysiert werden. Der Pull-Down-Assay ähnelt damit der <a href="Immunpr%C3%A4zipitation" title="Immunpräzipitation">Immunpräzipitation</a>, wobei der Protein-Tag die Funktion des <a href="Antik%C3%B6rper" title="Antikörper">Antikörpers</a> übernimmt. Häufig verwendete Protein-Tags sind z. B. Hexa-<a href="Histidin" title="Histidin">Histidin</a>-, <a href="Streptavidin" title="Streptavidin">Streptavidin</a>- und <a href="Glutathion-S-Transferase" class="mw-redirect" title="Glutathion-S-Transferase">Glutathion-S-Transferase</a>-tags. Eine Variante des Pulldown-Assays ist das <a href="Strep-Protein_Interaction_Experiment" title="Strep-Protein Interaction Experiment">Strep-Protein Interaction Experiment</a>.

</p><p>Neben dem klassischen Pulldown-Assay zum Nachweis von Protein-Protein-Interaktionen wurden auch gelegentlich ähnliche Methoden verwendet, um <a href="DNA" class="mw-redirect" title="DNA">DNA</a>-Protein-Wechselwirkungen zu untersuchen, wobei <a href="Biotin" title="Biotin">Biotin</a>-markierte DNA-Proben über <a href="Streptavidin" title="Streptavidin">Streptavidin</a> an die Matrix gebunden und als <i>bait</i> eingesetzt werden.<sup id="cite_ref-1" class="reference"><a href="#cite_note-1"><span class="cite-bracket">[</span>1<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>

</p>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Literatur">Literatur</h2></div>

<ul><li><a href="Friedrich_Lottspeich" title="Friedrich Lottspeich">Friedrich Lottspeich</a>, Haralabos Zorbas: <i>Bioanalytik</i>. Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 1998, ISBN 978-3-8274-0041-3.</li>

<li><a href="Hubert_Rehm" title="Hubert Rehm">Hubert Rehm</a>, Thomas Letzel: <i>Der Experimentator: Proteinbiochemie / Proteomics</i>. 6. Auflage, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 2009, ISBN 978-3-8274-2312-2.</li></ul>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Weblinks">Weblinks</h2></div>

/* start https://de.wikipedia.org/ */

.mw-parser-output .webarchiv-memento a{color:inherit}

/* end https://de.wikipedia.org/ */

</style><a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20071212062210/http://www.promega.com/guides/protein.interactions_guide/chap3.pdf">Pull-down assays</a> (<span class="webarchiv-memento"><a href="Webarchivierung#Begrifflichkeiten" title="Webarchivierung">Memento</a></span> vom 12. Dezember 2007 im <i><a href="Internet_Archive" title="Internet Archive">Internet Archive</a></i>) im Promega Protein Interaction Guide (engl.; PDF-Datei; 245 kB)</li>

<li><a rel="nofollow" class="external text" href="http://www.piercenet.com/Products/Browse.cfm?fldID=F3FD3612-415F-42A5-8922-736F9FDD36FB">Pull-Down Assays</a> – Beschreibung bei Thermo Scientific</li></ul>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Einzelnachweise">Einzelnachweise</h2></div>

<li id="cite_note-1"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-1">↑</a></span> <span class="reference-text">Kenneth K. Wu: <cite style="font-style:italic">Analysis of Protein-DNA Binding by Streptavidin-Agarose Pulldown</cite>. In: <cite style="font-style:italic">Methods in Molecular Biology</cite>. <span style="white-space:nowrap">Band<span style="display:inline-block;width:.2em"> </span>338</span>, 2006, <span style="white-space:nowrap">S.<span style="display:inline-block;width:.2em"> </span>281–290</span>, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<span class="uri-handle" style="white-space:nowrap"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1385/1-59745-097-9%3A281">10.1385/1-59745-097-9:281</a></span>.<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:Pulldown-Assay&rft.atitle=Analysis+of+Protein-DNA+Binding+by+Streptavidin-Agarose+Pulldown&rft.au=Kenneth+K.+Wu&rft.btitle=Methods+in+Molecular+Biology&rft.date=2006&rft.doi=10.1385%2F1-59745-097-9%3A281&rft.genre=book&rft.pages=281-290&rft.volume=338" style="display:none"> </span></span>

</li>

</ol></div><div><div class="zim-footer">

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